唐尧生物科技
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  • 服务描述
  • 4.2.2 针对正常细胞及肿瘤细胞的增殖抑制实验

    【生物背景】

    正常细胞及肿瘤细胞在增殖分裂的过程中,可以用MTT来指示活细胞的分裂增殖的活跃程度。MTT法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含50%N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值,以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。

    SRB实验方法,将处于对数生长期的细胞接于96孔板(200 µl /孔),培养24小时使之贴壁后加药。每个药物浓度设3个复孔,并设相应的调零孔及空白对照。药物作用72小时后,加入50 % TCA50 µl/孔),4固定1小时,倒掉固定液,用蒸馏水洗5次,自然干燥。每孔加入100 µl 4 mg/ml SRB,室温染色15分钟,弃之,用1 %冰醋酸洗5次,自然干燥。最后每孔加入150 µl10 mMTris 溶液,摇匀,用可调波长式微孔板酶标仪在565 nm波长下测定OD

     

    【雷火电竞官网app苹果项目】

    正常细胞及肿瘤细胞的增殖抑制实验

    SRB

    MTT

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    针对所有所有正常细胞株及肿瘤细胞株雷火电竞官网app苹果报价相同;

    周期:4-6

    送样量2~3mg

    (1) 检测一个化合物对一株细胞的IC50(测试8个浓度计算IC50值):880/ IC50值,化合物最少送样量为3个;

    (2) 检测一个化合物对一株细胞的单浓度抑制率:120/ 单浓度抑制率,化合物最少送样量为15个;

    (3)检测一个化合物对一株细胞的双浓度抑制率:218/ 双浓度抑制率,化合物最少送样量为7个;

       注:每个测试浓度都用双复孔。


    【结果例】

    SRB结果示例


    MTT结果示例


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